产品货号：
KL230801
中文名称：
细菌荚膜多糖纯化试剂盒
英文名称：
Bacterium Capsular Polysaccharide Extraction Kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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细菌荚膜多糖（CapsularPolysaccharide，CPS）是肺炎链球菌、B群链球菌、猪链球菌、流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌等致病细菌细胞壁外的一层胶状物质，是细菌表面的一种重要构成物质同时也是一种重要的保护性抗原。用化学方法纯化的CPS组分作为疫苗是重要免疫方法，因此纯化CPS具有重要的意义，为此本公司开发了CPS纯化试剂盒。
- 环保，不需要使用酚，氯仿等有机溶剂。
- 处理温和，能最大限度地保存CPS的抗原性。
- 可去除分子量小于10kD的CPS，蛋白、核酸和内毒素污染低。
- 适用于所有含CPS的细菌。
- 所得CPS可以直接用于后续的PAGE电泳-银染分析或其他分析。
- 足够50次微量制备，每次可以处理1～4mL饱和菌液，能得到50～200μg CPS。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 | 保存 |
| CPS纯化溶液A | 75mL | 室温 |
| CPS纯化成分B | 150mg | -20℃ |
| CPS纯化溶液C | 1.3mL | |
| CPS纯化溶液D | 1.3mL | 室温 |
| CPS纯化溶液E | 55mL | |
| CPS溶解液 | 10mL | |
| 排阻层析介质 | 75mL | |
| 离心吸附柱(5层膜) | 50套 |
保存：室温，其中成分B、溶液C置于-20℃，有效期1年。
一、纯化总CPS
- 按常规操作培养皿涂盘培养，得到单菌落。
- 从筛选平板上挑取单菌落至含3mL液体培养基的培养管中，适当温度震荡培养12～16小时（摇床转速200～300×g）。
- 转移1.5mL到1.5～2mL离心管中室温12000×g离心3分钟，弃上清。
- 再转移1.5mL到1.5～2mL离心管中室温12000×g离心3分钟，弃上清。
- 加入1mLCPS纯化溶液A到细菌沉淀中，涡旋振荡重悬，室温12000×g离心3分钟，弃上清。
- 再加入0.25mLCPS纯化溶液A到细菌沉淀中，涡旋振荡重悬细胞。
- 放-20℃或更低温度30分钟。若菌液没有冻成固体，则需延迟时间直到冻凝为止。
- 37℃化冻，加入大约3mgCPS纯化成分B干粉到细菌悬液中（用0.1mg精度的分析天平称量），轻柔颠倒20次混匀。
- 37℃金属浴6～8小时过夜放置。
- 14000×g离心3分钟得上清，去掉残留细胞。
- 加入25 μLCPS纯化溶液C和25 μLCPS纯化溶液D，轻柔颠倒20次混匀，55℃ 2小时。
- 加入0.1mL CPS纯化溶液E。
- 室温8000×g离心20分钟，转移上清到新离心管中。
- 加入1.1mL的CPS纯化溶液E颠倒20次混匀。
- 室温8000×g离心2分钟。
- 沉淀即CPS，加入50 μLCPS溶解液溶解CPS沉淀，立即用于后续实验。
二、除去小分子CPS
- 摇晃排阻层析介质至均匀，迅速转移0.5mL排阻层析介质到离心吸附柱中，套上套管，放入离心机，离心吸附柱盖柄朝外，2000×g室温离心1分钟，排阻层析介质将压紧在离心吸附柱中。
- 重复上步操作1次。
- 离心后，离心吸附柱中将得到体积约为0.5mL压紧的排阻层析介质。
- 倒掉套管中的穿透液（约1mL）。
- 在排阻层析介质的界面上加入50 μLCPS溶解液，套上套管，放入离心机，离心吸附柱盖柄朝外，2000×g室温准确离心1分钟。
- 重复上步操作1次。
- 在排阻层析介质的界面上加入50μL第16步得到的CPS粗提液，在离心吸附柱上套一个自备的1.5mL塑料离心管作为收集管。
- 放入离心机，离心吸附柱盖柄朝外，2000×g室温准确离心1分钟，分子量大于10kD的CPS将穿透到塑料离心管中，分子量小于10kD的CPS将滞留在介质中。
- 得到的CPS可放-20℃长期保存，或立即用于后续电泳等实验。
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